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细胞活力检测

五分pk拾更新时间:2019-05-29

简要描述:

MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,化学名称: 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。

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MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,化学名称: 3-(45-二甲基噻唑-2)-25-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。

操作步骤
1。收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度1000- 10000 /孔。
2.一定条件培养细胞适当时间,至细胞单层铺满96孔平底板,加入浓度梯度的药物。
3.适当条件培养适当时间,倒置显微镜下观察。
4.每孔加入10ul MTT溶液,继续培养1-4h。若药物与MTT能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS2-3遍后,再加入含MTT的培养液。
5。终止培养,小心吸去孔内培养液。
6.每孔加入100ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
活力计算:
细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A0加药)-A(空白)]×100
A(加药):具有细胞、MTT溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和MTT溶液而没有细胞的孔的吸光度
A0加药):具有细胞、MTT溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力
应用范围
1.抗肿瘤药物筛选
2.细胞毒性试验
3.肿瘤放射敏感性测定
服务期限
1-2周。

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