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更新时间:2019-04-01

免疫组化是应用免疫学基本原理-抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)

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免疫组化操作实验

1.石蜡切片脱蜡至水。

2.3%H 2 O2 室温孵育 5-10 分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。

3.蒸馏水冲洗, PBS 浸泡 5 分钟 x2 (如需抗原修复,可在此步后进行)。

4.5-10% 正常山羊血清(PBS 稀释)封闭,室温孵育 10 分钟,倾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 ℃ 孵育 1-2 小时或 4 ℃ 过夜。

5.PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。

6.滴加适量 生物素标记二抗 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。

7.PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。

8.滴加适量的 辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。

9. PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。

10.显色剂显色 3-15 分钟(DAB 或 NBT/BCIP)

11.自来水充分冲洗,苏木素复染,脱水,透明,封片。

免疫组化操作实验 结果判定:

阳性组织为棕色(DAB显色)或是紫红色(NBT/BCIP)着色

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