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更新时间:2019-04-10

慢病毒包装在基因功能的研究过程中,通过使用慢病毒介导的方法能够大大提高基因的转导效率,达到目的基因高效表达的目的。慢病毒主要应用于shRNA、LncRNA、cDNA以及报告基因的研究,慢病毒包装具有以下特点:
1)适用于难转染的细胞,如干细胞、原代细胞等,可很大程度的提高基因转导效率。
2)慢病毒整合细胞基因组,可进行稳转细胞株的筛选。
3)高纯度的慢病毒可用于活体动物模型。

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   慢病毒包装原理

    慢病毒表达质粒包含了包装、感染、稳定整合宿主细胞基因组所需的遗传信息,包装辅助质粒则提供了所有的转录、包装和重组假病毒所需要的辅助蛋白。为产出高滴度的病毒颗粒,通常将表达质:桶?爸柿9餐??局涟?跋赴?薪?胁《镜陌?。包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外培养液中。通过收集含病毒颗粒的上清,进行浓缩和纯化可获得高纯度和高滴度的慢病毒。

   慢病毒包装步骤

    1、转染前1天,将293T细胞接种于10 CM培养皿中,加入15 mL10FBSDMEM培养液,置37℃,5CO2培养至约7080%融合时,进行细胞转染。

    2、转染293T细胞

      (1)将慢病毒表达质:桶?爸柿<尤氲键/span>Opti-MEM中,混匀。

      (2)将适量的Lipofectamine 2000 (invitrogen)加入到Opti-MEM中,混匀。

      (35分钟后,将上述两混合液混匀,室温静置20分种后,将混合液加入至培养皿中,前后左右晃动摇匀。置37℃,5CO2培养箱中培养。

    3、6小时后,换含10FBSDMEM培养液10mL。

    4、转染48小时后,收集病毒上清,500g离心10分钟,0.45 μm滤器过滤。

    5、浓缩纯化后,分装,-80℃保存。

 

 

 

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