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更新时间:2019-04-10

ELISA检测有多种样式,有间接法ELISA检测,夹心法ELISA检测,竞争法ELISA检测等,不同的ELISA检测有不同的流程以及对样品有不同的要求,欢迎广大新老客户前来了解。

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  ELISA检测有多种样式,有间接法ELISA检测,夹心法ELISA检测,竞争法ELISA检测等,不同的ELISA检测有不同的流程以及对样品有不同的要求,欢迎广大新老客户前来了解!

  间接法ELISA检测:

  用特异性抗原包被固相载体,加入待测的抗体样品反应后,再加入酶标二抗,经底物显色后测定。间接法ELISA需要客户提供待检测样本和包被用的抗原。

  实验流程:

  1. 将抗原吸附于固相载体表面;

  2. 加待检抗体,形成抗原-抗体复合物;

  3. 加酶标抗体(抗抗体);

  4. 加入底物;

  5. 结果判定:有色产物的生成量=抗体量。

  样品要求:

  1. 客户需提供待检测抗体(也可由我们代购)和包被用抗原。;

  2. 检测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆时,样本收集后应立即-20度保存,若长期保存应-80度保存;

  3.样本量的要求:若一个指标做复孔检测应不少于250ul,做单孔检测应不少于120ul。建议若客户样本量充足zui好提供500ul以上。

  夹心法ELISA检测:

  用*抗原或抗体包被固相载体,加入待测的抗体或抗原反应后,再加入酶标的第二抗原或抗体,经底物显色后测定,即可计算出待测抗原的量。此方法所用抗原一般为大分子抗原,如蛋白等,不适用于多肽等半抗原。夹心法ELISA需要客户提供待检测标本和成对抗原或抗体(亦可由我们购买或制备抗体)。

  实验流程:

  1. 将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质;

  2. 加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时问,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物;

  3. 加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合;

  4. 加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。

  样品要求:

  1. 客户需提供待检测抗体(也可由我们代购)和包被用抗原。;

  2. 检测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆时,样本收集后应立即-20度保存,若长期保存应-80度保存;

  3.样本量的要求:若一个指标做复孔检测应不少于250ul,做单孔检测应不少于120ul。建议若客户样本量充足zui好提供500ul以上。

  竞争法ELISA检测:

  用特异性抗体包被固相载体,同时加入酶标抗原和待测抗原的混合物样本,待测抗原将与酶标抗原竞争与固相上抗体结合。经底物显色后测定,计算两组数值之差即可推出待测抗原的量。此方法常用于测定小分子抗原。竞争法ELISA需要客户提供待检测标本、包被抗体和酶标抗原(亦可由我们购买或制备抗原或抗体)。

  实验流程:

  1. 将抗体吸附在固相载体表面;

  2. 加入酶标抗原和待测抗原;

  3. 加入底物;

  4. 结果判定:对照孔与样品孔有色产物的生成量的差与未知抗原的量成负相关。

  样品要求:

  1. 客户需提供待检测抗体(也可由我们代购)和包被用抗原。;

  2. 检测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆时,样本收集后应立即-20度保存,若长期保存应-80度保存;

  3.样本量的要求:若一个指标做复孔检测应不少于250ul,做单孔检测应不少于120ul。建议若客户样本量充足zui好提供500ul以上。

  ELISA检测的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。

      酶联免疫吸附实验又叫ELISA检测!

  酶联免疫吸附实验,ELISA检测基本原理

  酶联免疫吸附实验,ELISA检测采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。

  在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂) ②酶标记的抗原或抗体(标记物)③酶作用的底物(显色剂)

  酶联免疫吸附实验,ELISA检测时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。

  其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。其方法简单,方便迅速,特异性强。

  酶联免疫吸附实验,ELISA检测特点

  1)灵敏性高

  该测定法的灵敏度来自作为报告基团的酶。众所周知, 酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应 ,产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。ELISA实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位,或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。

  2)酶联免疫吸附实验,ELISA检测特异性强

  其特异性来自抗体或抗原的选择性。抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系,所以抗原抗体反应具有高度的特异性。

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