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更新时间:2019-04-01

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)

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免疫组化原理

免疫组织化学利用了抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来,以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性,定位或定量的研究。

免疫组化操作步骤

⑴、石蜡切片脱蜡至水。

⑵、 3%H 2 O2 室温孵育 5-10 分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。

⑶、蒸馏水冲洗, PBS 浸泡 5 分钟 x2 (如需抗原修复,可在此步后进行)。

⑷、 5-10% 正常山羊血清(PBS 稀释)封闭,室温孵育 10 分钟,倾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 孵育 1-2 小时或 4 过夜。

⑸、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。

⑹、滴加适量 生物素标记二抗 工作液, 37 孵育 10-30 分钟。

⑺、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。

⑻、滴加适量的 辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素 工作液, 37 孵育 10-30 分钟。

⑼、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。

⑽、显色剂显色 3-15 分钟(DAB NBT/BCIP

⑾、自来水充分冲洗,苏木素复染,脱水,透明,封片。

免疫组化结果判定:

阳性组织为棕色(DAB显色)或是紫红色(NBT/BCIP)着色

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