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怎么保证荧光原位杂交技术fish检测的温度?
发布时间:2019-04-04   点击次数:20次
   怎么保证荧光原位杂交技术fish检测的温度?
  荧光原位杂交技术fish检测中最重要的因素是温度、光照、湿度和各种试剂的PH值。温度和湿度直接影响着探针和目标DNA的杂交效率;光照影响了荧光染料的强度;各种试剂pH是否符合要求直接关系到FISH的稳定性。
  如何保证荧光原位杂交技术fish检测操作中的温度呢?
  对于该问题zui佳的措施是使用一些FISH的专用仪器进行操作。如果是手工操作,首先要对FISH操作过程中可能使用的一些仪器进行温控能力的检查,诸如水浴锅、孵箱,对其中不符合要求的要进行更换(疾病诊断中的探针要求温控精度在1度以内)。其次,要尽可能地保持操作环境温度在20度以上,对于在冬季进行的FISH操作尤为重要。此外对于需要预热以达到要求温度的试剂,在使用前必须使用温度计对其进行测温。同时检测的样本zui好不能超过4块。操作中的行动一定要迅速。操作者还往往忽视一些小部件的温度,诸如载玻片和盖玻片。特别是在冬季,盖玻片本身温度就低,加之探针的量本就不多(10ul),因此事先没有预热的盖玻片会使得杂交液的温度急剧下降严重地影响了探针和目标DNA的杂交效率。因此对上述小部件的预热也能有效地提高FISH的杂交效果。使用荧光显微镜观察结果时,最初有清晰而明亮的信号。但随后信号急剧衰减。几分钟后信号就消失了。正常情况下,商业化探针即使是杂交后,如果保存适当,荧光信号能保持半年以上。出现上述情况主要的原因是操作观察的过程中或是探针的保存过程中没有采取严格的避光措施。阳光或是强的灯光都会使荧光染料发生急剧的淬灭,从而造成了观察结果的不稳定。因此在操作和观察时,尽可能在暗室中操作。也可以在封片观察时加入一定的antifade(抗淬灭剂)以延缓荧光素的淬灭。

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